モロヘイヤ中のトリプシンインヒビターについて

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  • Study on Trypsin Inhibitor from Tossa Jute
  • モロヘイヤチュウ ノ トリプシン インヒビター ニ ツイテ

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抄録

P(論文)

プロテアーゼインヒビターは,タンパク質分解作用に関わるのみでなく,さまざまな生理作用を持ち,プロテアーゼの制御因子として重要な役割を果たしている。モロヘイヤから70%硫安分画法,ラウリル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)法を用いて,トリプシンインヒビター(TI)活性を持ったタンパク質を分離精製した。モロヘイヤTI活性の測定にあたっては,モロヘイヤ70%硫安画分,トリプシン,基質としてカゼインを混和し,37℃,20分インキュベート後,トリクロロ酢酸を加え,遠心分離し,その上清の280nmの吸光度を分光光度計で測定した。その結果,TI存在下の反応液の吸光度の増加はみられなかった。プロテアーゼインヒビターのタンパク質をSDS-PAGE法を用いて解析した結果,100, 59, 55, 50kDaの分子量のタンパク質が存在することが分かった。非還元条件下でのSDS-PAGE解析の結果では,モロヘイヤのTIタンパク質の分子量は, 100kDa であることが分かった。TI活性の熱に対する安定性について,SDS-PAGE法を用いて解析したところ, 100℃で10分間処理したTIタンパク質は,トリプシンを阻害することはできなかった。

The protease inhibitor may be playing an important role in the metabolism of the plant restraining the endogenous proteinases or protecting the plant against foreign proteinases. A trypsin inhibitor(TI) was isolated and purified from the tossa jute (Corchorus olitorius L.) juice by 70% ammonium sulfate treatment. The inhibitory activity of TI was examined by photometical method and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The trypsin activity was analyzed by incubating 70% ammounium sulfate fraction of tossa jute mixed with trypsin and casein as substrate. The mixture was incubated at 37℃ for 20 minutes before trichloroacetic acid (TCA) solution was added to stop the process. After centrifugation, the absorbance of the supernatant of this reaction mixture was measured at 280nm with a spectrophotometer. The absorbance at 280nm of the reaction mixture containing TI has not increased at all. TI inhibited trypsin activities which catalyzed casein. Analyzed by SDS-PAGE, the molecular weights of TI was found to be 100, 59, 55, 50kDa. Under non-reducing conditions in SDS-PAGE gel, TI showed a single protein band with estimated molecular weight of 100kDa. After being treated at 100℃ for 10 minutes, TI could no longer inhibit trypsin activities, which proved that the trypsin-inhibitory activity of TI was heat-unstable.

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