タバコの2型プロリン水酸化酵素遺伝子のクローニングと局在解析

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タイトル別名
  • cDNA cloning and intracellular localization of tobacco type 2 prolyl 4-hydroxylases

抄録

植物特異的な蛋白質へのO-結合型糖鎖修飾の最初のステップは，蛋白質中のプロリン残基のヒドロキシプロリンへの変換であり，その反応には，1型または2型のプロリン水酸化酵素（P4H）が関与すると推定されている．この修飾機構の解析の一環として，今回はタバコの2型P4Hの解析を行った．まず，タバコから2型P4Hの完全長cDNAクローン3種類（NtP4H2.1，NtP4H2.2，NtP4H2.3）を単離した．これらのコードする蛋白質は共にN末端にシグナルペプチド，中間部分に活性ドメイン，C末端にTox1ドメインと呼ばれる機能未知のドメインを持っていた．続いて，タバコ培養細胞由来の膜画分を分画し，NtP4H2.2の分布を特異抗体を用いて解析したところ，その分布がシスゴルジのマーカーと一致することを見出した．また，分泌型GFPにN末端シグナルペプチドを除いたNtP4H2.2を融合させた蛋白質をタバコ培養細胞中に発現させると，シスゴルジのマーカーとの共局在を示すドット状のGFP蛍光が観察された．更に，ミクロソーム画分を超音波処理した後，膜画分と可溶性画分に分離したところ，殆どのNtP4H2.2は膜画分に回収された．従って，2型P4Hは，主にゴルジ装置に局在する膜蛋白質である．現在，細胞内局在と膜結合に果たすTox1ドメインの解析を進めており，これについても報告したい．

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詳細情報 詳細情報について

  • CRID
    1390001205633022208
  • NII論文ID
    130006994998
  • DOI
    10.14841/jspp.2009.0.0791.0
  • データソース種別
    • JaLC
    • CiNii Articles
  • 抄録ライセンスフラグ
    使用不可

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