DNA蛍光染色剤を用いたラット胸腺，脾臓および骨髄の免疫・造血系細胞のフローサイト解析法

DOI
  • 倉田 昌明
    ファイザー株式会社，中央研究所，安全性研究統括部，毒性研究室

書誌事項

タイトル別名
  • Flow cytometric analysis of immunocytes and hematopoietic cells from rat thymus, spleen and bone marrow using a fluorescent stain for DNA

説明

目的： DNA蛍光染色剤DRAQ5は，生きた細胞の核に結合し，その蛍光は赤色波長域で検出される。このDNA染色剤は有核細胞を染色するため，通常実施される測定前の溶血処置（NH4Clなどによる溶血処置）を省くことができる。今回，DNA蛍光染色剤を用いたラット胸腺，脾臓および骨髄の免疫・造血系細胞のフローサイト解析について検討を行った。<BR>方法：胸腺，脾臓および骨髄（大腿骨）はCrl:CD(SD)系ラットより得た。胸腺と脾臓からの細胞回収にはCell Strainerを用いた。細胞をリン酸緩衝生理食塩液（3％牛血清含有）に浮遊させ，各種蛍光標識抗体を加えた。一定時間後に遠心洗浄し，DRAQ5を加えた後，フローサイトメーター（Coulter Cytomics FC500）で測定・解析した。<BR>結果：胸腺，脾臓および骨髄のいずれにおいても，DRAQ5により有核細胞集団を区分できた。この集団について，CD3-FITC陽性細胞（Tリンパ球），CD45RA-PE陽性細胞（Bリンパ球），CD161a-PE陽性細胞（NK細胞）を分類することができた。脾臓と骨髄については，CD11b/c-FITCとCD71-PEにて，顆粒球系と赤芽球系細胞の分類も可能であった。胸腺については，CD4-PEおよびCD8a-FITCにて，CD4とCD8の陰性・陽性細胞を分類できた。いずれの解析でも，FL1（FITC標識），FL2（PE標識）およびFL4（DRAQ5染色）のコンペンセーション上の問題はみられなかった。<BR>結論：今回の成績は，DNA蛍光染色と蛍光標識抗体を用いることで，ラットの胸腺，脾臓および骨髄について，各種の免疫・造血系細胞の分類が可能であることを示している。測定前の溶血処置を行わない本方法は，毒性試験へのフローサイト適応において，簡便性の面で有用である思われる。

収録刊行物

詳細情報 詳細情報について

  • CRID
    1390001205659518464
  • NII論文ID
    130007004247
  • DOI
    10.14869/toxp.33.0.238.0
  • データソース種別
    • JaLC
    • CiNii Articles
  • 抄録ライセンスフラグ
    使用不可

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