臨床検体からエンテロウイルスD68 型を特異的に検出・同定するためのプライマー開発と RT-Seminested PCR 条件の決定

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タイトル別名
  • Optimizing RT-semi-nested PCR Conditions with Newly Developed Primers for the Specific Detection of Human Enterovirus D68 and its Identification from Clinical Specimens
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抄録

<p>エンテロウイルスD68 型（EV-D68）は，従来，呼吸器感染症の原因ウイルスと考えられてきた．近年，急性弛緩性麻痺の症例などから検出例が報告され，国内においても注目されている． EV-D68 を含むエンテロウイルス属（EV）の遺伝子検査は，VP4-VP2 領域を増幅するRT-Seminested-PCR 法（VP4-VP2-PCR 法）で遺伝子を検出する方法や，VP1 領域を増幅するCODEHOP RT-Seminested-PCR 法（CODEHOP 法）で血清型を同定する方法が広く使われている．この2 検査法を併用してEV-D68 の遺伝子検査を実施したところ，VP4-VP2-PCR 法で遺伝子が検出できたものの，CODEHOP 法でVP1 領域が増幅できず，血清型の同定ができない検体を複数確認した．また，VP4-VP2-PCR 法，CODEHOP 法ともに，複数の血清型のEV が重複感染している場合，いずれかの血清型が検出されない可能性が指摘されている．そこで，EV-D68 に対して高い感度，特異度を有し，加えて，EV の重複感染例に対してもEV-D68 を同定可能な検査法として，独自に設計したEV の血清型と関連の深いVP1 領域を増幅するプライマーを用いるRT-Seminested-PCR 法（本法）の開発を試みた．臨床検体を用いて検討した結果，本法は，VP4-VP2-PCR 法以上の感度があった．また，すでにEV-D68 以外のEV が同定されている2 検体より新たにEV-D68 を同定することができ，重複感染例に対してもEV-D68 を同定可能だった．加えて，1st-PCR における検出率が高く，系統樹解析に十分な長さの塩基配列を得ることができた． 以上より，本法は，EV-D68 を対象とした遺伝子診断の有用な手段と考えられた．</p>

収録刊行物

  • 感染症学雑誌

    感染症学雑誌 91 (3), 376-386, 2017-05-20

    一般社団法人 日本感染症学会

参考文献 (12)*注記

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