メチレンテトラヒドロ還元酵素遺伝子多型C677Tと葉酸摂取量、血清葉酸値および血漿ホモシステイン値との関連 ― 葉酸添加発酵乳を用いたシングルアーム介入試験―

【目的】葉酸添加発酵乳を付加し、メチレンテトラヒドロ還元酵素遺伝子多型別（MTHFR）C677T別に葉酸摂取量、血清葉酸値および血漿ホモシステイン値との関連を検討した。【方法】解析対象者は本学管理栄養士養成課程の1 年生女子65名、調査期間は2014年11月～12月である。介入食品にはプテロイルモノグルタミン酸（PtGlu1）200μg/100mL添加したビフィズス菌発酵乳（以下、葉酸添加発酵乳とする）を用いた。介入はシングルアーム試験である。血清葉酸値はCLEIA法、血漿ホモシステイン値はHPLC法で測定した。遺伝子多型は、口腔内粘膜を採取し、PCR-RFLP法で解析した。食事調査はFFQを用いた。なお、葉酸添加発酵乳の介入については、巨赤芽球性貧血、動脈硬化症などのリスクを血清葉酸値および血漿ホモシステイン値のカットオフ値を用いて評価した。統計解析は、対応のあるt 検定、一元配置分散分析、Pearsonの相関、χ2検定、Fisherの直接確率検定などを行った。【結果】介入前の平均葉酸摂取量は249μg/日であった。葉酸摂取量と血清葉酸値は正相関があり、血漿ホモシステイン値とは負相関していたが、統計的に有意ではなかった。血清葉酸値と血漿ホモシステイン値の間には介入前後とも中等度の有意な負の関連がみられた。介入前の血清葉酸値はCC>CTおよびTT に有意差があり、血漿ホモシステイン値は介入前後ともCC およびCT<TT に有意差があった。介入前後の変化率は、血清葉酸値は、全体で平均65％（CC 型；48％、CT 型；72％、TT型；74％）有意に上昇し、血漿ホモシステイン値は、全体で平均－22％（CC 型；－19％、CT 型；－21％、TT 型；－28％）の有意な低下がみられた。巨赤芽球性貧血予防のための血漿ホモシステインのカットオフ値（14nmol/mL）以上のリスクのある者は、介入前後とも2名（3.1％）であった。動脈硬化症の予防のためのカットオフ値（10nmol/mL）以上のリスク者は、全体で介入前9名（13.8％）から介入後2名（3.1％）に有意に減少した。遺伝子多型別にみると、介入によりCC 型2→0名、CT型前後とも0→0名で、TT型7名→2名へ減少した。この2名は巨赤芽球性貧血リスク者と同一対象者であった。【結論】本学女子大学生は、巨赤芽球性貧血の血清葉酸、血漿ホモシステインのカットオフ値の観点からみると、遺伝子多型に関わらず葉酸の栄養状態はほぼ良好であった。動脈硬化症リスクについては食事性葉酸を十分、摂取したうえで、葉酸添加食品（PtGlu1 200μg/日）の利用は有効であることが示唆された。

Objective: Using fermented milk with probiotics of Bifidobacterium breve fortified with 200 μg of pteroylmonoglutamic acid (PtGlu1) (fermented milk), we studied associations of folate consumption with serum folate concentrations and plasma homocysteine (pHcy) levels, and evaluated risks of megaloblastic anemia and atherosclerosis using the cut off point (COP) according to methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR C677T) genotype.Methods: The study subjects were 65 new-comers of the Course of Nutrition of Nagoya University of Arts and Sciences. A single arm intervention study was conducted from November-December 2014. Serum folate concentrations were measured with CLEIA, and pHcy with HPLC. Oral mucous membranes were sampled and genetic polymorphisms were assayed using PCR-RFLP. Food consumption was studied with FFQ. Paired t-test, one-way analysis of variance, Pearson correlation coefficient, Chi-square test, or Fisher’s direct probability method was appropriately adopted.Results: Average consumption of folate was 249μg at baseline. Folate consumption was positively associated with serum folate concentrations, but negatively with pHcy levels without statistical significance. Serum folate concentrations showed moderate negative correlations with pHcy both at baseline and after intervention (p<0.001). Serum folate concentrations of CC type were statistically greater than those of CT and TT, and pHcy levels of TT type were statistically greater than those of CC and CT. Serum folate concentrations after intervention increased by 65% as a whole compared with baseline value (CC type 48%, CT type 72%, and TT type 74%). PHcy levels decreased by 22% as a whole compared with baseline value (CC type 19%, CT type 21%, and TT 28%). Change rates of serum folate and pHcy by MTHFR genotype were not statistically significant. The number of subjects having pHcy greater than COP of megaloblastic anemia (14 nmol/mL) were two (3.1%) both at baseline and after intervention. Folate nutrition status was acceptable. The number of subjects who have pHcy greater than COP of atherosclerosis (10 moll/mL) were 9 (13.8%) at baseline decreased to 2 (3.1%) after intervention. Those who were at risk of atherosclerosis decreased from 2 to 0 for CC type, from 0 to 0 for CT type, and from 7 to 2 for TT type. These two subjects were the same persons being at risk of megaloblastic anemia, and their compliance of consumption of fermented milk were lower.Conclusions: In view of serum folate concentrations and pHcy levels comparing with COP of megaloblastic anemia, folate nutritional status of NUAS university students were acceptably fine, irrespectively of MTHFR genotypes, but there were nine subjects (13.8%) being at risk of atherosclerosis. Those people are advised to sufficiently consume dietary folate, and to consume fermented milk fortified with PtGlu1 200μg/day.