桑実胚期のウシ体外由来胚を輸送するための培養条件の検討

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タイトル別名
  • Culture method for transport of bovine morula-stage <i>in vitro</i> embryo

説明

<p>【目的】ウシ体外由来胚（体外胚）は凍結保存による損傷を受けやすいため，体外胚を保温培養しつつ輸送する技術は重要である。胚輸送のための保温器材には，蓄電池を要する細胞培養輸送器（38.5℃）と，蓄電池は要せず培養適温域より低い温度（36℃）の蓄熱資材がある。そこで本研究では輸送後の7日齢体外胚の移植を想定し，桑実胚期の体外胚の最適な培養条件を検証した。【方法】食肉センター由来の卵子卵丘細胞複合体を用い，当センター定法で体外成熟-体外受精-体外発生を行った。体外受精開始を0時間（0 hpi）とし，各条件で培養後，168 hpiの胚盤胞形成率（BL）および細胞数（TC）を調べた。試験1：96 hpi（96 h区）あるいは120 hpi（120 h区）の胚を36℃，大気下で48時間培養した。試験2：96 hpi（96 h区），120 hpi（120 h区）あるいは144 hpi（144 h区）の胚を36℃，大気下で24時間培養した。試験3：120 hpiの胚を25 mM Hepesおよび5% 血清（NCS）を添加したTCM199（H199区）あるいはCR1aa（HCR区）で，38.5℃，大気下で48時間培養した。なお，各試験の対照区の発生培養には5% NCS添加CR1aaを用い，5% CO2，38.5℃下で168 hpiまで培養した。【結果】試験1：BLは各区間で有意な差はなかったが，TCは対照区が96 h区（p＜0.05）および120 h区（p＜0.01）よりも有意に多かった。試験2：BLおよびTCともに各区間で有意な差はなかった。試験3：BLは各区で有意な差はなかったが，TCは対照区がH199区（p＜0.01）およびHCR区（p＜0.05）よりも有意に多かった。TCの比較から，大気下の36℃での培養時間は24時間までが適しており，38.5℃で48時間までの培養ではTCM199と比べCR1aaへのHepes添加が有効であると示唆された。本研究は生研支援センター「革新的技術開発・緊急展開事業（うち地域戦略プロジェクト）」の支援で実施した。</p>

収録刊行物

詳細情報 詳細情報について

  • CRID
    1390282752334191872
  • NII論文ID
    130007719261
  • DOI
    10.14882/jrds.112.0_p-126
  • 本文言語コード
    ja
  • データソース種別
    • JaLC
    • CiNii Articles
  • 抄録ライセンスフラグ
    使用不可

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