HIV-1 TAR RNAを標的とする蛍光インジケータ: モノメチンシアニン色素チアゾールオレンジの機能評価とFIDアッセイへの適用

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  • Fluorogenic Indicator for Targeting HIV-1 TAR RNA: Evaluation for Binging and Signaling Functions of Monomethine Cyanine Dye Thiazole Orange and Its Application to FID Assay
  • HIV-1 TAR RNA オ ヒョウテキ ト スル ケイコウ インジケータ : モノメチンシアニン シキソ チアゾールオレンジ ノ キノウ ヒョウカ ト FID アッセイ エ ノ テキヨウ

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抄録

<p>HIV-1 TAR（trans-activation responsive region）RNAを標的とするFID（fluorescent indicator displacement）assayのインジケータとして，モノメチンシアニン蛍光色素チアゾールオレンジ（thiazole orange, TO）が優れた機能を有することを見いだした．TOはTAR RNAに対して選択的に結合し，解離定数Kdは60±7 nM（N＝4）に達する（pH 6.5, 5℃）．TOはoff-on型の明瞭なlight-up応答を示し（ϕfree<0.01, ϕbound＝0.198），結合に伴い蛍光強度は約370倍増大する（λex＝501.5 nm，λem＝530.4 nm）．さらに，TOを活用するFIDアッセイは，ハイスループットスクリーニング（high throughput screening, HTS）に適用しうる十分な特性（Z'値>0.5）を持つ．これらの結果は，阻害剤探索ための基盤技術（スクリーニング法）の要となる蛍光インジケータ開発において有用な知見になると期待できる．</p>

収録刊行物

  • 分析化学

    分析化学 70 (3), 149-157, 2021-03-05

    公益社団法人 日本分析化学会

被引用文献 (1)*注記

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