定量PCR を用いた有害ラフィド藻Chattonella marina およびHeterosigma akashiwo 定量法の検討

DOI 機関リポジトリ (HANDLE) 日本農学文献記事索引 Web Site オープンアクセス
  • 向井 幸樹
    九州大学大学院農学研究院水産生物環境学研究室
  • 太田 耕平
    九州大学大学院農学研究院水産生物環境学研究室 | 九州大学大学院農学研究院海洋生物学研究室 : 准教授
  • 島崎 洋平
    九州大学大学院農学研究院水産生物環境学研究室 : 准教授
  • 鵜木（加藤） 陽子
    九州大学大学院農学研究院水産生物環境学研究室
  • 大嶋 雄治
    九州大学大学院農学研究院水産生物環境学研究室 : 教授

書誌事項

タイトル別名
  • Development of a Quantification Method of Harmful Raphidophytes Chattonella marina and Heterosigma akashiwo by the quantitative PCR assay
  • テイリョウ PCR オ モチイタ ユウガイ ラフィド ソウ Chattonella marina オヨビ Heterosigma akashiwo テイリョウホウ ノ ケントウ

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説明

定量PCR を用いて，海水中に存在する有害ラフィド藻Chattonella marinaおよびHeterosigma akashiwo遺伝子の検出法の検討を行った．プライマーおよびプロー ブ（TaqMan プローブ） は，C. marinaについてはmtDNA のcyt c 領域に，H. akashiwo についてはrRNA遺伝子のITS 領域に設定した．標的遺伝子の希釈系列を鋳型に用いた定量PCR の結果，高い増幅効率（C.marina：80.0 %； H. akashiwo：82.6 ％）が確認され，さらにCt 値と遺伝子コピー数との間に高い正の相関（C. marina：R^2 ＝ 0 . 991； H. akashiwo：R^2 ＝ 0 . 998）が認められた．また，他種藻類（渦鞭毛藻，珪藻等）からDNeasy Plant Mini Kit（QIAGEN）を用いて抽出したDNA に対して非特異的増幅を示さなかった．さらに両種を対数増殖期から衰退期まで培養し，検鏡および定量PCR による細胞密度の定量を行った結果，両定量値間には有意（p<0.05）な正の相関（C. marina：R^2 =0.84；H. akashiwo：R^2 =0.96）が観察された．以上の結果から，DNA 抽出から定量PCR に至る本法の有用性が強く示唆された．

はじめに / 材料と方法 / 結果 / 考察 / 謝辞 / 要約

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