Analysis of mouse PGCs migration for xenogeneic transplantation

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  • 異種間移植を想定したマウスPGCsの移動能の検討

Abstract

<p>【目的】始原生殖細胞（PGCs）は，将来配偶子に分化する細胞であり，アメーバ様運動を行いながら胚組織中を移動する。哺乳類のPGCsは，胚の形態形成と能動運動により生殖隆起（GR）へと移動するが，鳥類のPGCsはGRから離れた生殖三日月環に出現し，胚の血流に乗って移動する。哺乳類と鳥類のPGCsの移動経路・形式は異なるが，異種間で移植した場合，マウスPGCsがニワトリ胚中で移動するかどうかを検討した。【方法】交配12.5日目（12.5dpc）の雌雄のマウス（ICR）のGRを，10%ヒナ血清あるいはFCSを添加したDMEM培地で4から5日間器官培養した。その後，一次抗体に生殖細胞特異的な抗DDX4/MVH抗体（1,000倍希釈），二次抗体にAlexa594標識IgG（500倍希釈）とDAPI（1,000倍希釈）を用いて蛍光免疫染色を行い，マウスPGCsを観察した。また，孵卵6.5日目のニワトリ胚から採取したGRと12.5dpcのマウスGRを，トリプシンで細胞分散し，PGCsを含むGR由来細胞懸濁液をFCS添加培地で3から7日間共培養した。その後，蛍光免疫染色を行い観察した。さらに，12.5dpcのマウスPGCsをステージXのニワトリ胚盤に移植し，システムIIにより6.5日間孵卵した。発生した移植胚からGRを採取し，FCS添加培地で2から3日間培養後，蛍光免疫染色を行った。【結果】ヒナ血清添加培地で培養したマウスGRでは，GR内のみならずGR外にも抗体陽性細胞が確認され，その中には仮足を出している細胞も認められた。一方，FCS添加培地ではGR内のみに抗体陽性細胞が確認された。マウスとニワトリPGCsを共培養した結果，それぞれの細胞に対する抗DDX4抗体の反応は異なっており，培養7日目までは抗体陽性のマウスPGCsが確認された。また，マウスPGCsを移植したニワトリ胚GR中には，マウスPGCsと思われる細胞は確認されなかった。移植条件についてさらに検討が必要と考えられ，現在検討中である。</p>

Journal

Details 詳細情報について

  • CRID
    1390564227312600320
  • NII Article ID
    130007719338
  • DOI
    10.14882/jrds.112.0_p-63
  • Text Lang
    ja
  • Data Source
    • JaLC
    • CiNii Articles
  • Abstract License Flag
    Disallowed

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