特異的リボ核酸の分離法I : メチル化フィブロインカラムによる家蚕絹糸腺リボ核酸の連続溶出クロマトグラフ

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  • Studies on the isolation of a specific ribonucleic acid (I) : Gradient elution chromatography of silkworm silkgland RNA on a methylated fibroin column
  • 特異的リボ核酸の分離法-1-
  • トクイテキ リボ カクサン ノ ブンリホウ 1

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抄録

A linear gradient elution chromatography of RNA of the posterior silkgland of mature silkworm larvae was conducted on a methylated fibroin-celite column, in attempts at reviving the specific interaction in vivo between fibroin and a template RNA and also utilizing it to a unique method of isolating the protein-specific RNA. RNA was shown thereby to be well fractionated into 3 or 4 components at a low ionic strength and in a mild pH range of ca. 4.8 to 8.6, with a 100 % recovery. However, contrary to authors' reasoning, no substantial difference could have been detected in respect of the elution pattern between RNAs obtained from the normal worm and from the mutant worm incapable of synthesizing fibroin. Consequently, use of intact fibroin itself besides the methylated one was suggested as a more specific chromatographic interaction reagent. It is now under study with a partial success.

高分子リボ核酸(RNA)のクロマトグラブ分別剤としては現在セルローズの塩基性誘導体及びDowex樹脂等が広く用いられているが,それ等は温和な条件下においては回収率がかなり低い欠点がある.ピストンやメチル化アルブミンを用いる方法は,その点では一段とすぐれた方法ではあるが,これ等も亦任意の蛋白質分子中の塩基性基を利用するだけの非特異的な方法であつて,ヌクレオチド配列の多様性によるRNA分子の高度のheterogeneityから考えると,その分別能にはおのずから限界がある.著者等は,家蚕後部絹糸腺内における絹フィブロインの生合成機作,特に特徴的なアミノ酸組成及び配列を有するフィブロインに対応する特異的なRNA―広い意味で鋳型とも云える―を追求しつつあるが,如上の考察の結果から,フィブロイン生合成の場である後部絹糸腺RNAのクロマトグラフ的分劃,特にフィブロインに対応する特異的RNAの分離の目的には,これを鋳型として合成されると一応仮定されるフィブロインそれ自体を交換或は吸着剤として用いる事が,生物学的見地からも原理的に最も妥当ではないかと思惟した.しかもフィブロインは従来のヒストンやアルブミンとは異つて,かなり単純なアミノ酸組成及び配列を有する線状蛋白質であると云う点においても興味深く,又純粋に多量に得やすいと言う利点に恵まれている.一方,著者等は当学農学部蚕学教室の御厚意に依り,そこで系統を保存されている"セリシソ繭家蚕"をフィブロイン合成能に対するコントロールとして使用する機会を得た.この遺伝子突然変異種(通称Nd-II)は,後部糸腺に於ける変異のために正常のフィプロンの合成分泌能を喪失し,その代りに非繊維性の正体不明の蛋白を合成する.斯くて著者等は,RNAへのイオン的親和性をます為にメチル化したフィブロインカラムを用いて,正常蚕及びNd蚕の後部絹糸腺RNAのクロマトグラフを行なつた.

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