手動ポリメラーゼ連鎖反応法によるカイコの雌雄判別

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  • Sex determination of the silkworm, Bombyx mori, by manual polymerase chain reaction.
  • シュドウ ポリメラーゼ レンサ ハンノウホウ ニ ヨル カイコ ノ シユウ ハンベツ

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抄録

<p>先行研究から，カイコのＷ染色体（♀）を特異的に同定できる11のＲＡＰＤ（増幅断片多型ＤＮＡ）マーカーが見出された．その中から, W-Yukemuri-SとW-Bonsaiと名付けられたマーカーに着目し，サーマルサイクラー機器を用いて，ＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応）によるこれらマーカーの増幅条件を決定した：（１）ＤＮＡ抽出と鋳型ＤＮＡ量－カイコ後部糸腺からＤＮＡを上手く分離することができ，そのＤＮＡを反応液当たり2.5 ng以上/μＬを加えて，鋳型とした．（２）反応の繰り返し回数と反応温度の範囲一反応温度は, 92-96℃で30秒間, 56-61℃で30秒間, 68-73℃で１分間であり，この温度サイクルを30回繰り返した．これら条件下でのＰＣＲ産物をアガロース電気泳動で分離すると，単一の雌特異的マーカーバンドが現れた．</p><p>手動ＰＣＲ法を確立するために，３タイプの水槽－（１）ホットプレート付スターラーに置いた１Ｌビーカー, (2)スターラーに置いた温度制御器付恒温水槽, (3)温度制御器と噴流ポンプ式撹拌器を備えた恒温水槽－を用いた．これらの水槽の温度は，設定温度の1.5℃以内の範囲で制御することができ，これら水槽にサンプルを順次浮かべる操作を30回繰り返した．その結果，サーマルサイクラー機器を用いたＰＣＲと全く同じ増幅産物が得られ，雌特異的マーカーであるW-Yukemuri-SとW-Bonsaiが単一バンドとして検出された．これらの結果から，手動ＰＣＲ法によりカイコの雌雄判別ができることが明らかになった．高校生物の実験教材として導入した場合の有用性を４視点から考察した．</p>

収録刊行物

  • 生物教育

    生物教育 56 (1), 29-35, 2015

    一般社団法人 日本生物教育学会

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