コムギ由来プロテインジスルフィドイソメラーゼの発現，精製と性状

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  • Purification and Characterization of Wheat Protein Disulfide Isomerase Expressed in <i>Escherichia coli</i>
  • Purification and characterization of wheat protein disulfide isomerase expressed in Escherichia coli

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<p>　発芽・発根させたコムギ種子（品種ハルユタカ）の根部位よりRNAを抽出し，プロテインジスルフィドイソメラーゼ遺伝子（wPDI1～3）を取得した。wPDI1とwPDI3は1548bp, wPDI2は1539bpであり，アミノ酸レベルでの相同性は，wPDI1とwPDI2間で98.6％，wPDI1とwPDI3は99.2％，wPDI2とwPDI3は99.0％であった。wPDI2を用いて発現用ベクター構築した後，大腸菌を形質転換させリコンビナントPDI（rPDI）を調製した。インスリンを基質としたrPDIの総活性は114 U，比活性は336 U/mgであった。また，rPDIの酸化活性は，還元変性オボアルブミンのリフォールディングにて測定した。rPDIとコムギ粉中のPDI（native PDI）の性状を比較したところ，両PDIともに温度30℃，pH 8.5で最大活性を示したことから，rPDIはwPDIと類似の挙動を示すことを確認した。さらに，rPDIはnative PDIよりも温度，pHともに高い安定性を示した。本研究は，小麦由来PDIの発現に成功した初めての報告である。</p>

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